48 Wells / 96 Wells İnsan ELISA Kiti, Sandviç İnsan Leptin ELISA Kiti

96 oyuklu İnsan LEP için Yüksek Hassas ELISA Kiti

Katalog No E 1559 Hu

Standart Eğri Aralığı : 0.05 ng / ml - 10ng / ml

Hassasiyet : 0.021ng / ml

Boyut : 96 kuyu

Saklama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla depolama için son kullanma tarihine bakın -20 ° C'de tutun. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, tanı prosedürlerinde kullanılmaz. Kullanmadan önce bu talimatları tamamen okumanızı tavsiye ederiz.

P alışı

Tahlil İçi Hassasiyeti (Bir tahlil içindeki hassasiyet) Tahlil içi hassasiyetini değerlendirmek için bir plaka üzerinde bilinen konsantrasyonda üç numune test edildi.

Testler Arası Hassasiyet (Testler arasındaki hassasiyet) Testler arası hassasiyeti değerlendirmek için bilinen konsantrasyonda üç numune ayrı analizlerde test edildi.

CV (%) = SD / ortalama x 100

Test İçi: CV <% 8

Testler Arası: CV <% 10

Ben düşündüm

Bu sandviç kiti serum, plazma, hücre kültürü süpernatörleri, hücre lizatları, doku homojenatlarında insan Leptininin (LEP olarak da bilinir) doğru kantitatif tespiti içindir.

Reaktif Sağlandı

Not

• Numune konsantrasyonları tahlilde kullanılmadan önce tahmin edilmelidir. Numune konsantrasyonu standart eğrinin aralığında değilse, kullanıcılar kendi deneyleri için en uygun numuneyi belirlemek için bizimle iletişime geçmelidir.
• 5 gün içinde kullanılacak örnekler 2-8 ° C'de saklanmalıdır. Numuneler alikotlanmalı veya 1 ay içinde -20 ° C'de veya 6 ay içinde -80 ° C'de saklanmalıdır. Tekrarlanan donma çözülme döngülerinden kaçının.
• Teste başlamadan önce numuneler oda sıcaklığına getirilmelidir.
• Kullanmadan önce örnek toplamak için santrifüjleyin.
• NaN3 içeren örnekler, Horse Turp Peroksidazın (HRP) aktivitesini inhibe ettiği için test edilemez.
• Süpernatantları dikkatlice toplayın. Depolama sırasında tortular oluştuğunda, santrifüj tekrar yapılmalıdır.
• Hemoliz, test sonuçlarının geçerliliğini büyük ölçüde etkileyebilir. Hemolizi en aza indirmeye özen gösterin.

Tahlil Prosedürü

1. Tüm reaktifleri, standart çözeltileri ve numuneleri talimatlara uygun şekilde hazırlayın. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Test oda sıcaklığında yapılır.
2. Test için gerekli olan şerit sayısını belirleyin. Şeritleri kullanmak için çerçevelere yerleştirin. Kullanılmayan şeritler 2-8 ° C de saklanmalıdır.
3. Standart kuyuya standart 50 standardl ekleyin. Not : Standart çözelti biyotinlenmiş antikor içerdiğinden standart kuyucuğa antikor eklemeyin.
4. Numune oyuklarına 40 ul örnek ekleyin ve daha sonra numune oyuklarına 10 ul anti-LEP antikoru ilave edin, sonra numune oyuklarına ve standart oyuklara 50 ul streptavidin-HRP ekleyin (Boş kontrol kuyusu değil). İyice karıştırın. Plakayı bir sızdırmazlık maddesi ile örtün. 37 ° C'de 60 dakika inkübe edin.
5. Sızdırmazlık maddesini çıkarın ve plakayı yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın. Her yıkama için 30 saniye ile 1 dakika arasında en az 0,35 ml yıkama tamponu ile iyice ıslatın. Otomatik yıkama için, tüm kuyucukları aspire edin ve 5 defa yıkayıcı tamponu ile yıkayın, oyukları yıkama tamponu ile doldurun. Plakayı kağıt havluların veya diğer emici malzemelerin üzerine yerleştirin.
6. Her oyuğa 50μl substrat çözeltisi A ekleyin ve daha sonra her oyuğa 50 welll substrat çözeltisi B ekleyin. Karanlıkta 37 ° C'de 10 dakika boyunca yeni bir kapatıcı ile kaplı plaka inkübe edin.
7. Her kuyucuğa 50μl Stop Solüsyonu ekleyin, mavi renk hemen sarıya döner.
8. Durdurma çözeltisini ekledikten sonra 10 dakika içinde 450 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucu kullanarak derhal her oyuğun optik yoğunluğunu (OD değeri) belirleyin.

Referanslar

Geliyor DE, Gade R., Muhleman D., Peters WR, MacMurray JP
Mol. Genet. Metab. 73: 204-210 (2001)