Doğru Kantitatif Algılama için Yüksek Özgünlük Rat Catalase ELISA Kiti

CAT Yüksek özgüllük için 96 kuyu ELISA Kiti

Cat.No E0869 Ra

Standart Eğri Aralığı : 1ng / ml - 300ng / ml

Duyarlılık : 0.52ng / ml

Boyut : 96 kuyu

Depolama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla saklamalarda, son kullanma tarihine kadar -20 ° C'de saklayınız. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa, kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, teşhis prosedürlerinde kullanılmaz. Bu talimatı kullanımdan önce tamamen okumak tavsiye edilir.

Ben U se ben

Bu sandviç kiti, serum, plazma, hücre kültürü süpernatları, hücre lizatları, doku homojenatları içinde Rat Catalase (CAT olarak da bilinir) doğru kantitatif tespiti içindir.

Bir ssayfa P rinciple

Bu kit bir Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testidir (ELISA). Plaka, Rat CAT antikoru ile önceden kaplanmıştır. Numunede bulunan CAT eklenir ve kuyucuklarda kaplanan antikorlara bağlanır. Daha sonra biyotinlenmiş Rat CAT Antikoru eklenir ve örnekte CAT'a bağlanır. Daha sonra Streptavidin-HRP eklenir ve Biyotinile CAT antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra bağlanmamış Streptavidin-HRP bir yıkama adımı sırasında yıkanır. Substrat çözeltisi daha sonra eklenir ve renk Rat CAT miktarı ile orantılı olarak gelişir. Reaksiyon, asidik durdurma çözeltisi ilave edilerek sona erdirilir ve absorbans, 450 nm'de ölçülür.

Örnek toplama

Serum Serumun oda sıcaklığında 10-20 dakika pıhtılaşmasına izin verin. 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüj.

Plazma EDTA veya heparin kullanarak antikoagülan olarak plazma toplayın. Örnekleri 30 dakika boyunca 2 - 8 ° C'de 2000-3000 RPM'de 15 dakika santrifüjleyin.

İdrar Steril tüp ile toplayın. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin. Plevroperitoneal sıvı ve beyin omurilik sıvısı toplarken, lütfen yukarıda belirtilen prosedürleri uygulayın.

Hücre C oluşumu S üst fazı Salgı bileşenlerini incelerken steril tüplerle toplayın. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin. Süpernatanları dikkatlice toplayın. Hücre içindeki bileşenleri incelerken, hücre süspansiyonunu yaklaşık 1 milyon / ml'lik hücre konsantrasyonuna seyreltmek için PBS (pH 7.2-7.4) kullanın. İç bileşenleri dışarıda bırakmak için tekrarlanan donma-çözülme döngüleri ile hücreleri hasar verin. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin.

Doku Aşırı kanı iyice uzaklaştırmak ve homojenizasyondan önce tartmak için PBS içinde (pH 7.4) durulayın. Kıyma dokuları ve bunları buz üzerinde bir cam homojenleştirici ile PBS (pH7.4) içinde homojenize edin. 2-8 ° C'de çözülür veya -20 ° C'de dondurulur. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin.

Bir ssayfa P rocedure

1. Tüm reaktifleri, standart solüsyonları ve örnekleri talimatlara göre hazırlayın. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Analiz oda sıcaklığında gerçekleştirilir.

2. Test için gerekli şerit sayısını belirleyin. Şeritleri kullanım için çerçevelere yerleştirin. Kullanılmayan şeritler 2-8 ° C'de saklanmalıdır.

3. Standart kuyuya 50μl standart ekleyin. Not : Standart solüsyona antikor eklemeyin çünkü standart solüsyon biyotinile edilmiş antikor içerir.

4. Kuyuları örneklemek için 40 μl örnek ekleyin ve sonra kuyucuklara örnek vermek için 10μl anti-CAT antikoru ekleyin, sonra kuyucukları ve standart kuyucukları (Not blank control well) örneklemek için 50μl streptavidin-HRP ekleyin. İyice karıştırın. Plakayı bir sızdırmazlık maddesi ile örtün. 37 ° C'de 60 dakika inkübe edin.

5. Sızdırmazlık maddesini çıkarın ve plakayı 5 kez yıkama tamponuyla yıkayın. Her yıkama için 30 saniye ila en az 0.35 ml yıkama tamponu ile kuyucuklara batırın. Otomatik yıkama için, tüm kuyucukları aspire edin ve yıkama tamponuyla kuyucukları doldurarak yıkama tamponuyla 5 kez yıkayın. Plakayı kağıt havlulara veya diğer emici malzemelere yerleştirin.

6. Her kuyuya 50μl substrat solüsyonu A ekleyin ve her kuyuya 50μl substrat solüsyonu B ekleyin. Karanlıkta 37 ° C'de 10 dakika süreyle yeni bir kapatıcı ile kaplı plakayı inkübe edin.

7. Her kuyucuğa 50μl Durdurma Solüsyonu ekleyin, mavi renk hemen sarıya dönüşecektir.

8. Durdurma çözeltisini ekledikten sonra 10 dakika içerisinde 450 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucusu kullanarak hemen her oyuğun optik yoğunluğunu (OD değeri) belirleyin.

S um

1. Tüm reaktifleri, örnekleri ve standartları hazırlayın.
2. Her kuyuya örnek ve ELISA reaktifi ekleyin. 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.

3. Plakayı 5 kez yıkayın.

4. Substrat solüsyonu A ve B'yi ekleyin. 10 dakika 37 ° C'de inkübe edin.

5. Durma çözeltisi ekle ve renk gelişir.

6. OD değerini 10 dakika içinde okuyun.

Referanslar

Kim CH, Choi H., Chun YS, Kim GT, Park JW, Kim MS
Pflugers Arch. 442: 519-525 (2001)