Özelleştirilmiş İnterlökin 1 Alfa Sıçan ELISA Kiti Önceden - Rat IL 1A Antikoru ile Kaplanmış

Sıçan İnterlökin 1 Alfa için 96 kuyu Yüksek duyarlı ELISA Kiti

Cat.No E0118 Ra

Standart Eğri Aralığı : 1ng / L - 300ng / L

Duyarlılık : 0.48ng / L

Boyut : 96 kuyu

Depolama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla saklamalarda, son kullanma tarihine kadar -20 ° C'de saklayınız. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa, kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, teşhis prosedürlerinde kullanılmaz. Bu talimatı kullanımdan önce tamamen okumak tavsiye edilir.

Ben U se ben

Bu sandviç kiti, serum, plazma, hücre kültürü supernatları, hücre lizatları, doku homojenatları içinde, Rat Interleukin 1 Alpha'nın (aynı zamanda IL-1A olarak da bilinir) doğru kantitatif tespiti içindir.

Bir ssayfa P rinciple

Bu kit bir Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testidir (ELISA). Plaka, Rat IL-1A antikoru ile önceden kaplanmıştır. Numunede bulunan IL-1A eklenir ve kuyucuklarda kaplanan antikorlara bağlanır. Daha sonra biyotinile edilmiş Rat IL-1A Antikoru eklenir ve örnekte IL-1A'ya bağlanır. Daha sonra Streptavidin-HRP eklenir ve Biyotinile edilmiş IL-1A antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra bağlanmamış Streptavidin-HRP bir yıkama adımı sırasında yıkanır. Substrat çözeltisi daha sonra ilave edilir ve renk Rat IL-1A miktarıyla orantılı olarak gelişir. Reaksiyon, asidik durdurma çözeltisi ilave edilerek sona erdirilir ve absorbans, 450 nm'de ölçülür.

P önlemler

• Kullanmadan önce, kit ve numune doğal olarak oda sıcaklığına 30 dakika ısıtılmalıdır.
• Bu talimat deneyde kesinlikle takip edilmelidir.
• İstenilen sayıda şerit çıkarıldıktan sonra, kalıntıları bozulmadan korumak için hemen torbayı tekrar kapatın. Kullanılmadığı zaman tüm reaktifleri kapatın.
• Reaktifleri pipetleme yaparken pipetleme sırasına ve kuyudan ekleme oranına dikkat edin.
• Pipet uçları ve plaka sızdırmazlık malzemeleri, çapraz kontaminasyonu önlemek için temiz ve tek kullanımlık olmalıdır.
• Reaktifleri farklı partilerden birlikte kullanmaktan kaçının.
• Substrat çözeltisi B ışığa duyarlıdır, substrat solüsyonunu B uzun süre ışığa maruz bırakmaz.
• Durdurma çözeltisi asit içerir. Bu malzemeyi kullanırken lütfen göz, el ve cilt koruması kullanın. Kit reaktifi ile cilt veya mukoza zarlarının temasından kaçının.
• Kit son kullanma tarihinden sonra kullanılmamalıdır.

Yıkama Tamponu 500 ml 1x Yıkama Tamponu elde etmek için 20ml Yıkama Tampon Konsantresi 30x'i deiyonize veya damıtılmış suya seyreltin. Konsantratta kristaller oluşmuşsa, kristaller tamamen eriyene kadar nazikçe karıştırın.

Bir ssayfa P rocedure

1. Tüm reaktifleri, standart solüsyonları ve örnekleri talimatlara göre hazırlayın. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Analiz oda sıcaklığında gerçekleştirilir.

2. Test için gerekli şerit sayısını belirleyin. Şeritleri kullanım için çerçevelere yerleştirin. Kullanılmayan şeritler 2-8 ° C'de saklanmalıdır.

3. Standart kuyuya 50μl standart ekleyin. Not : Standart solüsyona antikor eklemeyin çünkü standart solüsyon biyotinile edilmiş antikor içerir.

4. Kuyuları örneklemek için 40 μl örnek ekleyin ve sonra kuyucuklara örnek vermek için 10μl anti-IL-1A antikoru ekleyin, sonra kuyucukları ve standart kuyucukları (Not boş kontrol kuyusu) için 50μl streptavidin-HRP ekleyin. İyice karıştırın. Plakayı bir sızdırmazlık maddesi ile örtün. 37 ° C'de 60 dakika inkübe edin.

5. Sızdırmazlık maddesini çıkarın ve plakayı 5 kez yıkama tamponuyla yıkayın. Her yıkama için 30 saniye ila en az 0.35 ml yıkama tamponu ile kuyucuklara batırın. Otomatik yıkama için, tüm kuyucukları aspire edin ve yıkama tamponuyla kuyucukları doldurarak yıkama tamponuyla 5 kez yıkayın. Plakayı kağıt havlulara veya diğer emici malzemelere yerleştirin.

6. Her kuyuya 50μl substrat solüsyonu A ekleyin ve her kuyuya 50μl substrat solüsyonu B ekleyin. Karanlıkta 37 ° C'de 10 dakika süreyle yeni bir kapatıcı ile kaplı plakayı inkübe edin.

7. Her kuyucuğa 50μl Durdurma Solüsyonu ekleyin, mavi renk hemen sarıya dönüşecektir.

8. Durdurma çözeltisini ekledikten sonra 10 dakika içerisinde 450 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucusu kullanarak hemen her oyuğun optik yoğunluğunu (OD değeri) belirleyin.

Referanslar

Westphal E., Li Chen, Pilowski C., Koch S., Ebelt H., Muller-Werdan U., Werdan K., Loppnow H.
J. Endotoksin Arş. 13: 25-34 (2007)