Özelleştirilmiş Bu sandviç kiti Yüksek Hassasiyetli Laboratuar Araştırma Rat Glial Fibril Asidik Protein ELISA Test Kiti

Özelleştirilmiş Bu sandviç kiti Yüksek Hassasiyetli Laboratuar Araştırma Rat Glial Fibril Asidik Protein ELISA Test Kiti

Standart Eğri Aralığı : 10pg / ml - 2000pg / ml

Hassasiyet : 5.43pg / ml

Boyut : 96 kuyu

Saklama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla depolama için son kullanma tarihine bakın -20 ° C'de tutun. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, tanı prosedürlerinde kullanılmaz. Kullanmadan önce bu talimatları tamamen okumanızı tavsiye ederiz.

Devirli P onarımı

Tüm reaktifler kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmelidir.

Standart 1200pg / ml standart stok çözeltisi oluşturmak için standart 120 thel'yi (2400pg / ml) 120μl standart seyreltici ile yeniden oluşturun. Dilüsyon yapmadan önce standardın hafifçe çalkalanarak 15 dakika oturmasını sağlayın. Standart stok çözeltisini (1200pg / ml) 1: 2'yi standart seyreltici ile 600pg / ml, 300pg / ml, 150pg / ml ve 75pg / ml çözeltiler üretmek üzere seri olarak seyrelterek çoğaltılmış standart noktaları hazırlayın. Standart seyreltici, sıfır standart (0 pg / ml) olarak işlev görür. Kalan çözelti -20 ° C'de dondurulmalı ve bir ay içinde kullanılmalıdır. Önerilen standart çözeltilerin seyreltilmesi aşağıdaki gibidir:

Yıkama Tamponu 20 ml Yıkama Tamponu Konsantresi 25x deiyonize veya distile suya seyreltin ve 500 ml 1x Yıkama Tamponu elde edin. Konsantre içinde kristaller oluştuysa, kristaller tamamen çözünene kadar yavaşça karıştırın.

Bir s der P rinciple

Bu elisa test kiti Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Tahlilidir (ELISA). Plaka, Rat GFAP antikoru ile önceden kaplanmıştır. Örnekte mevcut GFAP eklenir ve oyuklara kaplanmış antikorlara bağlanır. Daha sonra, biyotinile edilmiş Rat GFAP Antikoru ilave edilir ve numunedeki GFAP'a bağlanır. Daha sonra Streptavidin-HRP eklenir ve Biotinylated GFAP antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra bağlanmamış Streptavidin-HRP bir yıkama basamağı sırasında yıkanır. Substrat çözeltisi daha sonra ilave edilir ve Rat GFAP miktarıyla orantılı olarak renk gelişir. Reaksiyon, asidik durdurma çözeltisi ilave edilerek sonlandırılır ve absorbans, 450 nm'de ölçülür.

Örnek toplama

Serum Serum oda sıcaklığında 10-20 dakika pıhtılaşmaya bırakılır. 20 dakika 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin.

Plazma Antikoagülan olarak EDTA veya heparin kullanarak plazma toplayın. 2000 - 3000 RPM'de 15 dakika boyunca 2 - 8 ° C'de 30 dakika içinde santrifüjleyin.

İdrar Steril tüp ile toplayın. 2000-3000 RPM'de yaklaşık 20 dakika santrifüjleyin. Plöroperitoneal sıvı ve beyin omurilik sıvısı toplarken, lütfen yukarıda belirtilen prosedürleri izleyin.

Hücre Kültürü S upernatant Sekrete bileşenleri incelerken steril tüplerle toplayın. 2000-3000 RPM'de yaklaşık 20 dakika santrifüjleyin. Süpernatantları dikkatlice toplayın. Hücre içindeki bileşenleri incelerken, hücre süspansiyonunu yaklaşık 1 milyon / ml hücre konsantrasyonuna kadar seyreltmek için PBS (pH 7.2-7.4) kullanın. İç bileşenleri dışarıda bırakmak için tekrarlanan donma-çözülme döngüleri boyunca hücrelere zarar verin. 2000-3000 RPM'de yaklaşık 20 dakika santrifüjleyin.

Doku Aşırı kanın iyice alınması ve homojenleştirmeden önce tartılması için PBS'deki dokuları (pH 7.4) çalkalayın. Dokuları kıyın ve buz üzerinde bir cam homojenleştirici ile PBS (pH 7.4) içinde homojenize edin. 2-8 ° C'de çözün ya da -20 ° C'de dondurun. 2000-3000 RPM'de yaklaşık 20 dakika santrifüjleyin.

Not

• Numune konsantrasyonları tahlilde kullanılmadan önce tahmin edilmelidir. Numune konsantrasyonu standart eğrinin aralığında değilse, kullanıcılar kendi deneyleri için en uygun numuneyi belirlemek için bizimle iletişime geçmelidir.
• 5 gün içinde kullanılacak örnekler 2-8 ° C'de saklanmalıdır. Numuneler alikotlanmalı veya 1 ay içinde -20 ° C'de veya 6 ay içinde -80 ° C'de saklanmalıdır. Tekrarlanan donma çözülme döngülerinden kaçının.
• Teste başlamadan önce numuneler oda sıcaklığına getirilmelidir.
• Kullanmadan önce örnek toplamak için santrifüjleyin.
• NaN3 içeren örnekler, Horse Turp Peroksidazın (HRP) aktivitesini inhibe ettiği için test edilemez.
• Süpernatantları dikkatlice toplayın. Depolama sırasında tortular oluştuğunda, santrifüj tekrar yapılmalıdır.
• Hemoliz, test sonuçlarının geçerliliğini büyük ölçüde etkileyebilir. Hemolizi en aza indirmeye özen gösterin.

* Bu kitle bol miktarda sulandırılamaz . Kiti hazırlamak için kullandığımız malzeme nedeniyle, örnek matris girişimi testin özgüllüğü ve doğruluğunu yanlış şekilde düşürebilir.

Bir s P raketi

1. Tüm reaktifleri, standart çözeltileri ve numuneleri talimatlara uygun şekilde hazırlayın. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Test oda sıcaklığında yapılır.

2. Test için gerekli olan şerit sayısını belirleyin. Şeritleri kullanmak için çerçevelere yerleştirin. Kullanılmayan şeritler 2-8 ° C de saklanmalıdır.

3. Standart kuyuya 50μl standart ekleyin. Not : Standart çözelti biyotinlenmiş antikor içerdiğinden standart kuyucuğa antikor eklemeyin.

4. Numune kuyucuklarına 40μl numune ekleyin ve daha sonra numune oyuklarına 10 antil anti-GFAP antikoru ekleyin, daha sonra numune oyuklarına ve standart oyuklara 50μl streptavidin-HRP ekleyin (Boş kontrol kuyusu değil). İyice karıştırın. Plakayı bir sızdırmazlık maddesi ile örtün. 37 ° C'de 60 dakika inkübe edin.

5. Kapatıcıyı çıkarın ve plakayı 5 kez yıkama tamponu ile yıkayın. Her yıkama için 30 saniye ile 1 dakika arasında en az 0,35 ml yıkama tamponu ile iyice ıslatın. Otomatik yıkama için, tüm kuyucukları aspire edin ve 5 defa yıkayıcı tamponu ile yıkayın, oyukları yıkama tamponu ile doldurun. Plakayı kağıt havluların veya diğer emici malzemelerin üzerine yerleştirin.

6. Her kuyucuğa 50μl substrat çözeltisi A ekleyin ve daha sonra her kuyucuğa 50μl substrat çözeltisi B ekleyin. Karanlıkta 37 ° C'de 10 dakika boyunca yeni bir kapatıcı ile kaplı plaka inkübe edin.

7. Her kuyucuğa 50μl Stop Solüsyonu ekleyin, mavi renk hemen sarıya döner.

8. Durdurma çözeltisini ekledikten sonra 10 dakika içinde 450 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucu kullanarak derhal her oyuğun optik yoğunluğunu (OD değeri) belirleyin.

Referanslar

"Glial fibril asidik protein (GFAP) kaybı, Schwann hücre proliferasyonunu bozar ve hasardan sonra sinir yenilenmesini geciktirir."

Triolo D., Dina G., Lorenzetti I., Malaguti M., Morana P., Del Carro Ü., Comi G., Messing A., Quattrini A., Previtali SC

J. Celi. Sci. 119: 3981-3993 (2006)