Lipopolisakkaritler Algılama için 2 Saat Test Uzunluğu Sıçan ELISA Kiti Özelleştirme

96 Kuyu 48 Wells Özelleştirilmiş Sıçan Lipopolisakkaritler ELISA Kiti 2 Saat Tahlil Süresi

Cat.No E 0756Ra

Standart Eğri Aralığı : 2EU / L - 600EU / L

Duyarlılık : 1.02EU / L

Boyut : 96 kuyu

Depolama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla saklamalarda, son kullanma tarihine kadar -20 ° C'de saklayınız. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa, kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, teşhis prosedürlerinde kullanılmaz. Bu talimatı kullanımdan önce tamamen okumak tavsiye edilir.

P recision

Intra-Assay Precision (Deneyde Hassasiyet) Test içi kesinliği değerlendirmek için bilinen konsantrasyonun üç örneği bir plaka üzerinde test edildi.

Inter-Assay Precision (Deneyler arası Kesinlik) Test edilen kesinliği değerlendirmek için bilinen konsantrasyonun üç örneği ayrı analizlerde test edilmiştir.

CV (%) = SD / ortalama x 100

Intra-Assay: CV <% 8

Inter-Assay: CV <% 10

Ben U se ben

Bu sandviç kiti, serum, plazma, hücre kültürü süpernatları, hücre lizatları, doku homojenatları içinde Rat Lipopolisakkaritlerin (aynı zamanda LPS olarak da bilinir) doğru kantitatif tespiti içindir.

Bir ssayfa P rinciple

Bu kit bir Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testidir (ELISA). Plaka, Rat LPS antikoru ile önceden kaplanmıştır. Numunede bulunan LPS eklenir ve kuyucuklarda kaplanan antikorlara bağlanır. Daha sonra biyotinlenmiş Sıçan LPS Antikoru eklenir ve örnekte LPS'ye bağlanır. Daha sonra Streptavidin-HRP eklenir ve Biyotinile LPS antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra bağlanmamış Streptavidin-HRP bir yıkama adımı sırasında yıkanır. Substrat çözeltisi daha sonra eklenir ve renk Rat LPS'nin miktarı ile orantılı olarak gelişir. Reaksiyon, asidik durdurma çözeltisi ilave edilerek sona erdirilir ve absorbans, 450 nm'de ölçülür.

R eagent P rovided

P önlemler

• Kullanmadan önce, kit ve numune doğal olarak oda sıcaklığına 30 dakika ısıtılmalıdır.
• Bu talimat deneyde kesinlikle takip edilmelidir.
• İstenilen sayıda şerit çıkarıldıktan sonra, kalıntıları bozulmadan korumak için hemen torbayı tekrar kapatın. Kullanılmadığı zaman tüm reaktifleri kapatın.
• Reaktifleri pipetleme yaparken pipetleme sırasına ve kuyudan ekleme oranına dikkat edin.
• Pipet uçları ve plaka sızdırmazlık malzemeleri, çapraz kontaminasyonu önlemek için temiz ve tek kullanımlık olmalıdır.
• Reaktifleri farklı partilerden birlikte kullanmaktan kaçının.
• Substrat çözeltisi B ışığa duyarlıdır, substrat solüsyonunu B uzun süre ışığa maruz bırakmaz.
• Durdurma çözeltisi asit içerir. Bu malzemeyi kullanırken lütfen göz, el ve cilt koruması kullanın. Kit reaktifi ile cilt veya mukoza zarlarının temasından kaçının.
• Kit son kullanma tarihinden sonra kullanılmamalıdır.

Örnek toplama

Serum Serumun oda sıcaklığında 10-20 dakika pıhtılaşmasına izin verin. 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüj.

Plazma EDTA veya heparin kullanarak antikoagülan olarak plazma toplayın. Örnekleri 30 dakika boyunca 2 - 8 ° C'de 2000-3000 RPM'de 15 dakika santrifüjleyin.

İdrar Steril tüp ile toplayın. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin. Plevroperitoneal sıvı ve beyin omurilik sıvısı toplarken, lütfen yukarıda belirtilen prosedürleri uygulayın.

Hücre C oluşumu S üst fazı Salgı bileşenlerini incelerken steril tüplerle toplayın. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin. Süpernatanları dikkatlice toplayın. Hücredeki bileşenleri incelerken, yaklaşık 1 milyon / ml hücre konsantrasyonuna hücre süspansiyonu seyreltmek için PBS (pH 7.2-7.4) kullanın. İç bileşenleri dışarıda bırakmak için tekrarlanan donma-çözülme döngüleri ile hücreleri hasar verin. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin.

Doku Fazla kanı iyice uzaklaştırmak ve homojenizasyondan önce tartmak için PBS (pH 7.4) 'da dokuları durulayın. Kıyma dokuları ve bunları buz üzerinde bir cam homojenleştirici ile PBS (pH7.4) içinde homojenize edin. 2-8 ° C'de çözülür veya -20 ° C'de dondurulur. Yaklaşık 20 dakika boyunca 2000-3000 RPM'de santrifüjleyin.

* S bu kitle seyreltilemez . Kiti hazırlamak için kullandığımız malzeme sayesinde, örnek matris etkileşimi, testin özgüllüğünü ve doğruluğunu yanlış bir şekilde bastırabilir.

R eagent P onarımı

Tüm reaktifler kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmelidir.

Standart 320EU / L standart stok çözeltisi üretmek için 120μl standart seyreltici ile standart (640EU / L) 120μl'yi sulandırın. Seyreltmeden önce standardın 15 dakika boyunca hafifçe çalkalanması için bekleyin. Standart stok çözeltisini (320EU / L) 1: 2 standart seyreltici ile 160EU / L, 80EU / L, 40EU / L ve 20EU / L solüsyonları üretmek için seri olarak seyrelterek standart standart noktaları hazırlayın. Standart seyreltici sıfır standart (0 EU / L) olarak hizmet eder. Kalan herhangi bir çözelti -20 ° C'de dondurulmalı ve bir ay içinde kullanılmalıdır. Önerilen standart çözeltilerin seyreltilmesi aşağıdaki gibidir:

Yıkama Tamponu 500 ml 1x Yıkama Tamponu elde etmek için 20ml Yıkama Tampon Konsantresi 30x'i deiyonize veya damıtılmış suya seyreltin. Konsantratta kristaller oluşmuşsa, kristaller tamamen eriyene kadar nazikçe karıştırın.

özet

1. Tüm reaktifleri, örnekleri ve standartları hazırlayın.

2. Her kuyucuğa örnek ve ELISA reaktifi ekleyin. 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.

3. Plakayı 5 kez yıkayın.

4. Substrat solüsyonu A ve B'yi ekleyin. 10 dakika 37 ° C'de inkübe edin.

5. Durma çözeltisi ekleyin ve renk gelişir.

6. 10 dakika içinde OD değerini okuyun.

C Sonuçların tasfiyesi

Yatay (X) eksenindeki konsantrasyona karşı dikey (Y) eksenindeki her bir standart için ortalama OD'yi çizerek standart bir eğri oluşturun ve grafik üzerindeki noktalardan en uygun bir eğri çizin. Bu hesaplamalar en iyi bilgisayar tabanlı eğri uydurma yazılımı ile gerçekleştirilebilir ve en uygun satır regresyon analizi ile belirlenebilir.