Özelleştirilmiş Sıçan ELISA Kiti 2 Saat Testi Süresi ile Mannma Bağlama Proteini

Özelleştirilmiş Fare Mannma Bağlama Protein Mannan Bağlama Lectin MBP MBL ELISA Kiti

Cat.No E 0629 Ra

Standart Eğri Aralığı : 0.5ng / ml - 100ng / ml

Hassasiyet : 0.25ng / ml

Boyut : 96 kuyu

Saklama : Reaktifleri 2-8 ° C'de saklayın. 6 aydan fazla depolama için son kullanma tarihine bakın -20 ° C'de tutun. Tekrarlanan çözülme döngülerinden kaçının. Bireysel reaktifler açılırsa kitin 1 ay içinde kullanılması önerilir.

* Bu ürün sadece araştırma amaçlıdır, tanı prosedürlerinde kullanılmaz. Kullanmadan önce bu talimatları tamamen okumanızı tavsiye ederiz.

Bir s der P rinciple

Bu kit Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Tahlilidir (ELISA). Plaka, Rat MBP / MBL antikoru ile önceden kaplanmıştır. Örnekte mevcut olan MBP / MBL eklenir ve oyuklarda kaplanan antikorlara bağlanır. Ve sonra biyotinile edilmiş Rat MBP / MBL Antikoru eklenir ve örnekteki MBP / MBL'ye bağlanır. Daha sonra Streptavidin-HRP eklenir ve Biotinylated MBP / MBL antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra bağlanmamış Streptavidin-HRP bir yıkama aşaması sırasında yıkanır. Substrat çözeltisi daha sonra ilave edilir ve sıçan MBP / MBL miktarıyla orantılı olarak renk gelişir. Reaksiyon, asidik durdurma çözeltisi ilave edilerek sonlandırılır ve absorbans, 450 nm'de ölçülür.

Ben düşündüm

Bu sandviç kiti, Rat Mannma Bağlayıcı Protein, Mannan Bağlayıcı Lectin'in (MBP / MBL olarak da bilinir) serum, plazma, hücre kültürü supernatlerinde, hücre lizatlarında, doku homojenatlarında doğru kantitatif tespiti içindir.

P önlemler

• Kullanımdan önce, kit ve numune doğal olarak 30 dakika oda sıcaklığına ısıtılmalıdır.
• Bu talimat kesinlikle deneyde takip edilmelidir.
• İstenilen sayıda şerit çıkarıldıktan sonra, kalıntının bozulmaması için derhal torbayı tekrar kapatın. Kullanılmadığında tüm reaktifleri örtün.
• Pipetleme reaktiflerini pipetleme sırasına ve pipetleme sırasında kuyucuktan kuyucuğa ekleme oranına dikkat edin.
• Eldeki pipet uçları ve plaka kapatıcı, çapraz kontaminasyonu önlemek için temiz ve tek kullanımlık olmalıdır.
• Farklı partilerin reaktiflerini birlikte kullanmaktan kaçının.
• Substrat çözeltisi B ışığa duyarlıdır, substrat çözeltisi B'yi uzun süre ışığa maruz bırakmayın.
• Durdurma çözeltisi asit içerir. Lütfen bu malzemeyi kullanırken göz, el ve cilt koruması kullanın. Kit reaktifiyle cilt veya mukoza zarlarına temas etmekten kaçının.
• Kit son kullanma tarihinden sonra kullanılmamalıdır.

R eagent P rovided

Devirli P onarımı

Tüm reaktifler kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmelidir.

Standart 64ng / ml'lik standart bir stok çözeltisi oluşturmak için standardın 120μl'ini (128ng / ml) 120μl standart seyreltici ile yeniden oluşturun. Dilüsyon yapmadan önce standardın hafifçe çalkalanarak 15 dakika oturmasını sağlayın. 32ng / ml, 16ng / ml, 8ng / ml ve 4ng / ml çözeltileri üretmek için standart stok çözeltisini (64ng / ml) 1: 2 standart seyreltici ile seri olarak seyrelterek çift standart noktaları hazırlayın. Standart seyreltici, sıfır standart (0 ng / ml) olarak işlev görür. Kalan çözelti -20 ° C'de dondurulmalı ve bir ay içinde kullanılmalıdır. Önerilen standart çözeltilerin seyreltilmesi aşağıdaki gibidir:

Yıkama Tamponu 500 ml 1x Yıkama Tamponu elde etmek için 20ml Yıkama Tamponu Konsantresi 30x deiyonize veya distile suya seyreltin. Konsantre içinde kristaller oluştuysa, kristaller tamamen çözünene kadar yavaşça karıştırın.

Bir s P raketi

1. Tüm reaktifleri, standart çözeltileri ve numuneleri talimatlara uygun şekilde hazırlayın. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Test oda sıcaklığında yapılır.

2. Test için gerekli olan şerit sayısını belirleyin. Şeritleri kullanmak için çerçevelere yerleştirin. Kullanılmayan şeritler 2-8 ° C de saklanmalıdır.

3. Standart kuyuya 50μl standart ekleyin. Not : Standart çözelti biyotinlenmiş antikor içerdiğinden standart kuyucuğa antikor eklemeyin.

4. Numune kuyucuklarına 40μl numune ekleyin ve daha sonra numune kuyucuklarına 10μl anti-MBP / MBL antikoru ekleyin, daha sonra numune kuyucuklarına ve standart kuyucuklara 50μl streptavidin-HRP ekleyin (Boş kontrol kuyusu değil). İyice karıştırın. Plakayı bir sızdırmazlık maddesi ile örtün. 37 ° C'de 60 dakika inkübe edin.

5. Kapatıcıyı çıkarın ve plakayı 5 kez yıkama tamponu ile yıkayın. Her yıkama için 30 saniye ile 1 dakika arasında en az 0,35 ml yıkama tamponu ile iyice ıslatın. Otomatik yıkama için, tüm kuyucukları aspire edin ve 5 defa yıkayıcı tamponu ile yıkayın, oyukları yıkama tamponu ile doldurun. Plakayı kağıt havluların veya diğer emici malzemelerin üzerine yerleştirin.

6. Her kuyucuğa 50μl substrat çözeltisi A ekleyin ve daha sonra her kuyucuğa 50μl substrat çözeltisi B ekleyin. Karanlıkta 37 ° C'de 10 dakika boyunca yeni bir kapatıcı ile kaplı plaka inkübe edin.

7. Her kuyucuğa 50μl Stop Solüsyonu ekleyin, mavi renk hemen sarıya döner.

8. Durdurma çözeltisini ekledikten sonra 10 dakika içinde 450 nm'ye ayarlanmış bir mikroplaka okuyucu kullanarak derhal her oyuğun optik yoğunluğunu (OD değeri) belirleyin.

S özeti

1. Tüm reaktifleri, örnekleri ve standartları hazırlayın.

2. Her kuyuya örnek ve ELISA reaktifi ekleyin. 37 ° C'de 1 saat inkübe edin.

3. Plakayı 5 kez yıkayın.

4. Substrat çözeltisi A ve B'yi ekleyin. 37 ° C'de 10 dakika inkübe edin.

5. Durdurma çözeltisi ekleyin ve renk gelişir.

6. OD değerini 10 dakika içinde okuyun.

Referanslar

"Oligodendrositlerdeki miyelin bazik proteinin safha spesifik ekspresyonu, Spl transkripsiyon faktörü tarafından hafifletilen Nkx2.2 aracılı represyonu içerir."
Wei Q., ​​Miskimins WK, Miskimins R.
J. Biol. Chem. 280: 16284-16294 (2005)